膳食纖維的測定要經歷什麼流程

　　自然界中大約有千種以上的膳食纖維◕•。不同來源的膳食纖維│▩☁↟，因其化學組成的差異很大│▩☁↟，故生理效應差異也很大◕•。膳食纖維的共同特點是小腸酶不能分解利用│▩☁↟，具有較低能量值│▩☁↟，而且在腸道菌的作用下發酵可產生短鏈脂肪酸│▩☁↟，促進益生菌等發揮廣泛的健康作用◕•。

　　總膳食纖維為不能被α-澱粉酶☁☁☁☁╃、蛋白酶和葡萄糖苷酶酶解的碳水化合物聚合物,包括不溶性膳食纖維和能被乙醇沉澱的高分子質量可溶性膳食纖維,如纖維素☁☁☁☁╃、半纖維素☁☁☁☁╃、木質素☁☁☁☁╃、果膠☁☁☁☁╃、部分回生澱粉,及其他非澱粉多糖和美拉德反應產物等◕•。

　　2☁☁☁☁╃、試樣製備

　　取試樣直接反覆粉碎,至全部過篩◕•。混勻,待用◕•。若試樣水分含量較高,試樣混勻後,稱取適量試樣(mC),置於70℃真空乾燥箱內乾燥至恆重◕•。將乾燥後試樣轉至乾燥器中,待試樣溫度降到室溫後稱量(mD)◕•。

　　3☁☁☁☁╃、 酶解

　　3.1 分散試樣

　　準確稱取試樣(m),約1g(精確至0.1 mg),將試樣轉置於400mL~600mL高腳燒杯中,加入0.05mol/L MES-TRIS緩衝液40mL,用磁力攪拌直至試樣全部分散在緩衝液中◕•。攪拌均勻,避免試樣結成團塊,以防止試樣酶解過程中不能與酶充分接觸◕•。

　　3.2 熱穩定α-澱粉酶酶解

　　向試樣液中分別加入50μL熱穩定α-澱粉酶液緩慢攪拌,加蓋鋁箔,置於95 ℃恆溫振盪水浴箱中持續振搖,當溫度升至95 ℃開始計時,反應35min◕•。將燒杯取出,冷卻至60 ℃,開啟鋁箔蓋,用刮勺輕輕將附著於燒杯內壁的環狀物以及燒杯底部的膠狀物刮下,用10mL水沖洗燒杯壁和刮勺◕•。

　　3.3 蛋白酶酶解

　　將試樣液置於60℃水浴中,向每個燒杯加入100μL蛋白酶溶液,蓋上鋁箔,開始計時,持續振搖,反應30min◕•。開啟鋁箔蓋,邊攪拌邊加入5mL3mol/L 乙酸溶液,控制試樣溫度保持在60 ℃◕•。用1mol/L 氫氧化鈉溶液或1mol/L鹽酸溶液調節試樣液pH 至4.5◕•。

　　3.4 澱粉葡糖苷酶酶解

　　邊攪拌邊加入100μL澱粉葡萄糖苷酶液,蓋上鋁箔,繼續於60 ℃水浴中持續振搖,反應30min◕•。

　　4☁☁☁☁╃、總膳食纖維測定

　　4.1 沉澱

　　向每份試樣酶解液中,按乙醇與試樣液體積比4∶1的比例加入預熱至60 ℃的95%乙醇(預熱後體積約為225mL),取出燒杯,蓋上鋁箔,於室溫條件下沉澱1h◕•。

　　4.2 抽濾

　　取已加入矽藻土並乾燥稱量的坩堝,用15mL78%乙醇潤溼矽藻土並展平,接上真空抽濾裝置,抽去乙醇使坩堝中矽藻土平鋪於濾板上◕•。將試樣乙醇沉澱液轉移入坩堝中抽濾,用刮勺和78%乙醇將高腳燒杯中所有殘渣轉至坩堝中◕•。

　　4.3 洗滌

　　分別用78%乙醇15mL洗滌殘渣2次,用95%乙醇15mL洗滌殘渣2次,丙酮15mL洗滌殘渣2次,抽濾去除洗滌液後,將坩堝連同殘渣在105℃烘乾過夜◕•。將坩堝置乾燥器中冷卻1h,稱量(mGR,包括處理後坩堝質量及殘渣質量),精確至0.1mg◕•。減去處理後坩堝質量,計算試樣殘渣質量(mR)◕•。

　　4.4 蛋白質和灰分的測定

　　取2份試樣殘渣中的1份測定氮(N)含量,以6.25為換算係數,計算蛋白質質量(mP);另1份試樣測定灰分,即在525 ℃灰化5h,於乾燥器中冷卻,精確稱量坩堝總質量(精確至0.1mg),減去處理後坩堝質量,計算灰分質量(mA)◕•。

　　5☁☁☁☁╃、結果計算